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ELISA實驗結果90%取決于它!樣本處理全攻略
更新時間:2025-10-24瀏覽:109次

  ELISA實驗結果90%取決于它!樣本處理全攻略

  ELISA實驗結果的可靠性高度依賴樣本處理的規(guī)范性,以下是關鍵要點總結:

  一、樣本類型與處理原則

  血清/血漿?

  血清需室溫靜置1-2小時或4℃過夜后,3000×g離心15-20分鐘,避免溶血和反復凍融?。

  血漿需使用EDTA或肝素抗凝,采集后30分鐘內離心,避免室溫放置過久導致因子降解?。

  細胞培養(yǎng)上清?

  1000×g離心20分鐘去除碎片,建議分裝保存并避免凍融?。若檢測低豐度蛋白,可濃縮樣本。

  組織/細胞裂解液?

  組織需按1:9(w/v)加入含蛋白酶抑制劑的PBS勻漿,冰上超聲或凍融裂解后5000×g離心?。

  貼壁細胞需胰酶消化后PBS洗滌,超聲裂解時建議3×5秒(冰上操作)?。

  二、關鍵注意事項

  避免假陽性?:樣本需嚴格無菌,防止細菌污染(含內源性HRP)或纖維蛋白原干擾?。

  防止假陰性?:目標蛋白易降解時需添加蛋白酶抑制劑,避免使用含NaN3或高濃度EDTA的保存液?。

  標準化操作?:離心參數、凍融次數需統一,不同批次樣本處理條件需一致?。

  三、特殊樣本處理

  腦脊液/尿液?:需5000-6000×g離心去除沉淀,分裝后-80℃保存。

  酸化樣本?:部分樣本需用HCl中和后檢測(如某些細胞因子)?。

  四、常見錯誤與優(yōu)化

  高背景?:可能因封閉不充分或洗滌不凈,建議使用5%脫脂牛奶+0.05% Tween-20封閉液?。

  重復性差?:建議預實驗確定樣本稀釋倍數,確保OD值在標準曲線線性范圍內。

  通過規(guī)范樣本處理流程,可顯著提升ELISA數據的準確性和重復性?。

  注:以上僅供參考,不作為實際數據,實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

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