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Elisa實驗:ELISA試劑盒的靈敏度該如何判定?
更新時間:2025-08-28瀏覽:42次

  ELISA試劑盒的靈敏度該如何判定?

  ELISA試劑盒的靈敏度判定需結(jié)合以下關(guān)鍵指標(biāo)和方法綜合評估:

  一、靈敏度的定義與核心指標(biāo)?

  檢測限(LOD)?

  指能可靠檢測到目標(biāo)物的低濃度,計算公式為:

  LOD = 空白信號均值(Sb) + 3 × 空白信號標(biāo)準(zhǔn)差(σ)? ?。

  實際應(yīng)用中,試劑盒說明書常標(biāo)注“靈敏度"即對應(yīng)LOD(如10pg/mL)?。

  定量限(LOQ)?

  可準(zhǔn)確定量的低濃度,計算公式為:

  LOQ = Sb + 10 × σ? ?。

  通常要求信號變異系數(shù)(CV)≤20%,確保結(jié)果可重復(fù)?。

  二、判定方法?

  標(biāo)準(zhǔn)曲線驗證?

  選擇低濃度標(biāo)準(zhǔn)品(如LOD附近濃度),重復(fù)檢測3次,計算信號強(qiáng)度與背景噪聲的比值(S/N≥3為合格)?。

  加標(biāo)回收率測試?

  在樣本中添加已知濃度的目標(biāo)物,檢測回收率應(yīng)在80%-120%范圍內(nèi)?。

  示例:若添加50pg/mL標(biāo)準(zhǔn)品,測得濃度為45-55pg/mL則符合要求。

  稀釋線性實驗?

  對樣本進(jìn)行梯度稀釋,檢測信號值與理論值的偏差應(yīng)≤20%?。

  三、實驗優(yōu)化建議?

  樣本處理?:避免反復(fù)凍融,離心去除干擾物?。

  對照設(shè)置?:同步檢測空白對照(僅緩沖液)和陰性樣本,確認(rèn)無交叉反應(yīng)?。

  數(shù)據(jù)分析?:優(yōu)先選擇線性范圍內(nèi)(R2≥0.99)的數(shù)據(jù)點(diǎn)計算濃度?。

  四、常見誤區(qū)?

  混淆“靈敏度"與“檢測范圍":靈敏度是LOD,而檢測范圍是標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性區(qū)間(如30-900pg/mL)?。

  忽略批間差異:板內(nèi)變異系數(shù)應(yīng)<5%,板間變異系數(shù)應(yīng)<15%?。

  通過上述方法可系統(tǒng)評估試劑盒靈敏度,確保實驗數(shù)據(jù)的可靠性。

  注:以上資料僅供參考,如需進(jìn)一步了解產(chǎn)品詳情,可參考品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師。

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